PCR (lančana reakcija polimeraze) je temeljna tehnologija u molekularnoj dijagnostici. Standardizacija njegovih procesa pakiranja i ispitivanja izravno utječe na točnost i biološku sigurnost rezultata. Ovaj članak pruža profesionalnu perspektivu ključnih točaka kontrole kvalitete tijekom cijelog postupka testiranja PCR -a.
Primanje uzorka i prethodna obrada prvi su koraci u tom procesu. Laboratoriji moraju strogo provjeriti identifikaciju uzorka, uvjete transporta i vrijeme skladištenja kako bi se osigurao integritet uzorka. Nakon primitka, uzorci moraju biti numerirani i registrirati u kabinetu za biološku sigurnost i podvrgnuti postupcima obrade prije - kao što su liza i ekstrakcija nukleinske kiseline na temelju tipa ispitivanja. Tijekom ove faze potreban je dva - sustav za provjeru osobe kako bi se spriječilo kontaminaciju križa -.
Priprema PCR reakcijskog sustava mora se izvesti unutar čiste klupe. Operatori moraju nositi zaštitnu opremu razine 3 i koristiti nuklearnu - besplatne potrošne materijale. Priprema reagensa pridržava se principa "jednosmjerni tijek rada", prelazeći s područja pripreme reagensa u područje za obradu uzorka, a zatim do područja pojačanja. Negativne kontrole, pozitivne kontrole i unutarnje kontrole moraju biti uključeni u svaku reakcijsku seriju kako bi se nadgledala eksperimentalna valjanost.
Tijekom faze pojačanja i ispitivanja, PCR instrument mora biti prije - kalibriran i parametri temperaturnog ciklusa. Postupak reakcije obično uključuje tri koraka: denaturacija (94 - 95 stupnjeva), žarenje (50-65 stupnjeva) i proširenje (72 stupnja). Broj ciklusa se podešava na temelju cilja otkrivanja. Fluorescentna fluorescencija u stvarnom vremenu također zahtijeva praćenje praga signala fluorescencije specifičnih kanala.
Analiza rezultata i izvještavanje moraju izvršiti kvalificirani tehničari. Sirove podatke moraju pregledati najmanje dva profesionalaca kako bi potvrdili morfologiju krivulje pojačanja, vjerodostojnost vrijednosti CT -a i usklađenost s materijalima za kontrolu kvalitete sa standardima. Završno izvješće treba sadržavati informacije o metodologiji ispitivanja, osnova za interpretaciju rezultata i izjavu o ograničenjima ispitivanja.
Cijeli se postupak strogo pridržava ISO 15189 i relevantne CDC specifikacije. Sustav trostrukog jamstva za nadzor okoliša, održavanje opreme i obuku osoblja provodi se kako bi se osigurala pouzdanost i sljedivost PCR ispitivanja.